Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展极快的过程中逐渐扩展

从第一次浮现胰脏自身突变到浮现1标准型肝炎外科副作用的实质性叛将在成年人时期就有良好的叙述，多个胰脏自身突变无症状的成年人当则有70%在血清转换后10年内复发肝炎，而随访15年的成年人这一%降低到84%。相较之下，占外科1标准型肝炎一半以上的标准型1标准型肝炎的就诊的系统还没有得到适当的分析方法。

越来越多的人开始常用分阶段支配系统来定义1标准型肝炎的实质性：个体在浮现多种胰脏自身突变时转入第1收尾，浮现高血压诱发时转入第2收尾，浮现副作用时转入第3收尾。一些多发胰脏自身突变无症状的个体，在1期和2期，实质性较比慢，并发展为就诊的1标准型肝炎。我们早先叙述了一四组在首次监测到多种胰脏自身突变结果显示后将近10年无肝炎的极比慢实质性者，这四组病人总人数少，但相似性非常明确。随后，我们推断出胰脏自身特异性特异性CD8+T肝细胞重排在实质性缓比慢的病人当中必需不存在，但在现阶段就诊和长期存在的肝炎病人当中很难以监测到。这可能指出，与实质性病人相较，这些病人自身免疫重排的调节增强。

早期分析方法指出，尽管调节性T肝细胞(Treg)为数长时间，但肝炎病人存在一些特性缺陷，其当中包括对IL-2的重排灵活性提高。此外，肝炎病人当中的畸变CD4+T肝细胞可能对调节更具抵抗性，平庸为畸变T肝细胞的诱发减弱，自然诱发的Treg和灌注诱发的其会Treg，以及特异性个人经历的CD4+T肝细胞当中IL-2重排减弱。本分析方法的目的是叙述了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在群集极缓比慢实质性者当中的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX分析方法是一项以人群为基础的纵向分析方法，在21岁此表就诊的病人子女当中检查1标准型肝炎的危险因素。我们早先叙述了长期缓比慢实质性者的相似性，他们保持多重胰脏自身突变无症状超过10年，但没有浮现肝炎的外科副作用，比慢性或非顺利外阴自身免疫。随后，10名此后保持无肝炎并愿意透过大量血液结果显示的缓比慢实质性者划入T和B肝细胞特性分析方法。在现在的分析方法当中，8名比慢实质性者(SP四组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的胰脏自身突变无症状。所有的举例来说都始终保持1标准型肝炎实质性的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身突变对某些特异性的无症状重排，然而，一名病人已经始终保持2期将近6年，但没有浮现外科副作用，一名病人被诊断为肝炎，该病患72岁，在捕获实验结果显示时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法当中对该诱导顺利进行了实质上评估。剥离外周血单个质子肝细胞(PBMCs)，采用多常量流式肝细胞精和T肝细胞诱发试验评估诱导当中Treg的频叛将、表标准型和特性。常用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和回归)顺利进行无行政官员聚类分析方法，评估Treg表标准型。

结果：与心理健康诱导相较，来自比慢实质性体的遗忘CD4+T肝细胞的行政官员聚类推测，酪氨酸的遗忘CD4+ Treg频叛将降低，与糖皮质激素其会的TNFR相关蛋白(GITR)理解降低有关。一名HbA1c升高的病人与实质性缓比慢者和匹配的解读四组相较，Treg著者有所并不相同。特性分析方法指出，与心理健康诱导相较，来自缓比慢实质性体的Treg介导的CD4+畸变T肝细胞诱发明显受损。平庸为对畸变CD4+T肝细胞CD25和CD134理解的诱发降低。

所示1 深入的表标准型分析方法推测，CD4+Treg亚标准型在比慢实质性表头当中降低。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有诱导的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标识物理解认定出10个元簇:遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;文件支配系统Treg_1;文件支配系统Treg_2;文件支配系统Treg_3;和文件支配系统Treg_4。(a)常用9个并不相同Treg标识降解的10个元簇的MST。每个路由表都是一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在路由表四组一处打磨。每个路由表当中的糕点所示表示单个标识的理解分级。(b)每个元聚类的热所示，以推测整体标识理解。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)降解所示，以及FlowSOM标识的每个元簇的沙质。(e-l)一般来说质子素为每个metacluster箱内新所示表(质子素> 0.05%)确定为HD和SP四组:文件支配系统Treg_2 (e),文件支配系统Treg_3 (f),文件支配系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T肝细胞(l)。深蓝色白点都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩验证。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 常用CITRUS的预测模标准型属实，Treg频叛将的降低是实质性缓比慢的标志。分级门控(a - f)和甜菜分析方法(g-k)比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的都是性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利进行剥离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)四组以及诱导SP 606(深蓝色)当中CD25+ cd127的频叛将综合所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控同构的箱内新所示表;(c) HLA-DRloGITR−(文件支配系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件支配系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件支配系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件支配系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度上色，标记突出的簇被标识为SP和HD表头二者之间的并不相同。(j)箱内新所示表推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组当中，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的一般来说质子素(%)。(k)缩放推测每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标识一般来说理解与背景理解(蓝色);上列，文件支配系统Treg_3;下面一行，文件支配系统Treg_4。背景与所有其他簇当中标识的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩验证

所示3 与心理健康献血者相较，实质性缓比慢者遗忘treg的GITR降低。每个遗忘CD4+T肝细胞元簇(遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;文件支配系统Treg_2;文件支配系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个理解标识的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的理解热所示(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇当中所有HD(棕色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR理解串联，推测缩放(c)和综合所示(d)。Wilcoxon类推符号秩和验证，p< 0.07(深蓝色)所有诱导包括，p< 0.05(蓝色)诱导SP 606和匹配的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR理解，从分级门控，从所有HD(棕色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，推测缩放(e)和综合所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推符号秩验证

所示4 来自缓比慢实质性的CD4+ treg肝细胞支配畸变CD4+T肝细胞的灵活性提高。SP四组用蓝色的新线和白点表示，HD四组用黄色的新线和白点表示，深蓝色的新线/白点表示诱导sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标识为CFSE, Treg按判读的%试样。用抗CD3 /28微珠重置肝细胞，指导3在此之后顺利进行流式肝细胞精监测。(a-d)与CD4+这样的话者一般来说应的treg指导(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者指导。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE诱发多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发多于。常用无症状解读(酪氨酸的响应肝细胞不含treg)计算诱发多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 畸变CD4+T肝细胞对缓比慢实质性的T肝细胞重置的诱发更敏感。SP四组用蓝色的新线和白点表示，HD四组用黄色的新线和白点表示，深蓝色的新线/白点表示诱导sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标识，treg按判读的%试样。用抗CD3 /28微珠重置肝细胞，指导3在此之后顺利进行流式肝细胞精(CD25反染)和肝细胞因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同指导。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE诱发百分叛将(b)。(c,d) CD25诱发百分叛将(c)和CD134诱发百分叛将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导当中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自缓比慢实质性子的重置遗忘CD4+Treg在GITR理解当中得到了扩展和充沛，强调了进一步分析方法Treg在1标准型肝炎风险个体当中的异质性的全面性。

标题应是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28